Rnase A
Ribonukleazė A (RNaseA) yra vienos grandinės polipeptidas, turintis 4 disulfidines jungtis, kurių molekulinė masė yra apie 13,7 kDa.RNazė A yra endoribonukleazė, kuri specifiškai skaido vienos grandinės RNR ties C ir U liekanomis.Konkrečiai, skilimas atpažįsta fosfodiesterio ryšį, susidarantį iš nukleotido 5'-ribozės ir fosfato grupės, esančios gretimo pirimidino nukleotido 3'-ribozėje, todėl 2,3'-cikliniai fosfatai hidrolizuojasi iki atitinkamų 3. „nukleozidų fosfatai (pvz., pG-pG-pC-pA-pG skaido RNazė A, kad susidarytų pG-pG-pCp ir A-PG).RNazė A yra aktyviausia skaidant vienos grandinės RNR.Rekomenduojama darbinė koncentracija yra 1-100 μG/mL, suderinama su įvairiomis reakcijų sistemomis.Maža druskos koncentracija (0-100 mM NaCl) gali būti naudojama viengrandei RNR, dvigrandei RNR ir RNR grandinėms, susidariusioms RNR-DNR hibridizacijos būdu, pjaustyti.
Tačiau esant didelei druskos koncentracijai (≥0,3 M), RNazė A specifiškai skaido tik vienos grandinės RNR.
RNazė A dažniausiai naudojama RNR pašalinti ruošiant plazmidinę DNR arba genominę DNR.Nesvarbu, ar DNazė yra aktyvi paruošimo proceso metu, gali lengvai paveikti reakciją.DNazės aktyvumui inaktyvuoti gali būti naudojamas tradicinis virimo vandens vonioje metodas.Šiame gaminyje nėra DNazės ir proteazės, todėl prieš naudojant nereikia termiškai apdoroti.Be to, šis produktas taip pat gali būti naudojamas atliekant molekulinės biologijos eksperimentus, tokius kaip RNazės apsaugos analizė ir RNR sekos analizė.
Laikymo sąlygos
Produktas turi būti laikomas -25 ℃ ~ - 15 ℃ temperatūroje 2 metus.
Specifikacijos
| Išvaizda | Milteliai |
| Kiekis | 100 mg / 1 g |
| Produkto tipas | RNazė A |
Instrukcijos
Tai vienas iš įprastų RNazės A saugojimo tirpalo paruošimo metodų.Taip pat galima paruoštikitais metodais pagal tradicinius metodus laboratorinėje arba informacinėje literatūroje (pvztiesiogiai ištirpinama 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 arba Tris-NaCl tirpale)
1. Naudokite 10 mM natrio acetatą (pH 5,2), kad paruoštumėte 10 mg/mL RNazės A laikymo tirpalą.
2. Kaitinimas 100 ℃ 15 min.
3. Atvėsinkite iki kambario temperatūros, įpilkite 1/10 tūrio 1 M Tris-HCl (pH 7,4), sureguliuokite pH iki 7,4 (jeiPavyzdžiui, įpilkite 500 ml 10 mg/ml RNazės laikymo tirpalo 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Supakuota -20 ℃ temperatūroje, skirta laikyti užšaldyta, kuri gali būti stabili iki 2 metų.
[Pastabos]:
Verdant RNazės A tirpalą neutraliomis sąlygomis, susidarys RNazės nuosėdos;Virinama esant žemesniam pH, o jei yra kritulių, tai gali būti pastebėta dėl baltymų priemaišų.Jei po virinimo aptinkamos nuosėdos, priemaišas galima pašalinti centrifuguojant dideliu greičiu (13 000 aps./min.), o po to supakuoti į užšalimą.
Pastabos
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą.
