Mėginio atpalaidavimo reagentas
Mėginio atpalaidavimo reagentas yra skirtas molekulinės POCT diagnostikos scenarijams.Naudojant dvi tiesioginio amplifikacijos LAMP ir tiesioginio amplifikacijos PGR sistemas, nereikia ekstrahuoti nukleorūgšties.Neapdorotas mėginio lizatas gali būti tiesiogiai amplifikuojamas, tikslinis genas gali būti tiksliai aptiktas, mėginio aptikimo laikas gali būti dar labiau sutrumpintas, o tai puikiai atitinka molekulinio POCT taikymo reikalavimus.Jis tinka nosies, gerklės tamponams ir kitų tipų mėginiams.Apdoroti mėginiai gali būti tiesiogiai naudojami realaus laiko fluorescenciniam kiekybiniam PGR arba LAMP aptikimui, ir be sudėtingų nukleorūgščių ekstrahavimo operacijų galima pasiekti tokius pačius rezultatus, kaip ir įprastiniais ekstrahavimo metodais.
Laikymo sąlygos
Transportuoti ir laikyti kambario temperatūroje.
Kokybės kontrolė
Funkcinis aptikimas – kiekybinis qPCR: 800 μl mėginio atpalaidavimo reagento sistema buvo sustiprinta
su 1000 naujojo pseudoviruso kopijų, vienu nosies tampono mėginiu, dėl kurio susidaro panašios amplifikacijos kreivės irΔCt vertės ± 0,5 Ct ribose.
Eksperimentinė procedūrares
1. Paimkite 800 μl mėginio atpalaidavimo reagento ir paskleiskite lizės tirpalą į 1,5 ml mėgintuvėlį
2. Paimkite nosies tamponą arba gerklės tamponą su tamponu;Nosies tampono mėginių ėmimo procedūra: paimkite sterilų tamponą ir įkiškite į šnerves, lėtai judėkite iki maždaug 1,5 cm gylio, švelniai pasukite 4 kartus prie nosies gleivinės ilgiau nei 15 sekundžių. , tada pakartokite tą pačią operaciją su kita nosies ertme su tuo pačiu tamponu.Gerklės tampono mėginių ėmimo procedūra: paimkite sterilų tamponą ir švelniai greitai nuvalykite ryklės tonziles ir galinę ryklės sienelę 3 kartus.
3.Nedelsdami įdėkite tamponą į mėginių ėmimo vamzdelį.Tampono galvutę reikia pasukti ir maišyti laikymo tirpale mažiausiai 30 sekundžių, kad mėginys būtų visiškai išplautas mėginio ėmimo mėgintuvėlyje.
4. Inkubuojama kambario temperatūroje (20–25 ℃) 1 min., baigiamas lizės buferio paruošimas.
5. Tiek 25 μl sistemos RT-PGR, tiek RT-LAMP buvo suderinami su 10 μl šablono pridėjimu aptikimo eksperimentams.
Pastabos
1. Minimalus mėginio tiesioginio lizato kiekis, atitinkantis vieną tamponą, gali būti nustatytas iki 400 μl, kuris gali būti koreguojamas pagal tyrimo poreikius.
2. Kai mėginys apdorojamas mėginio atpalaidavimo reagentu, kitą tyrimo etapą rekomenduojama atlikti kuo greičiau, geriausia laukimo trukmė yra trumpesnė nei 1 valanda.
3. Mėginio lizato pH yra rūgštus, o aptikimo sistemoje turi būti tam tikras buferis.Jis tinka daugeliui PGR, RT-PGR ir LAMP fluorescencijos aptikimo su pH buferiu, bet netinka LAMP kolorimetriniam aptikimui be buferio.
