One Step RT-qPCR SYBR Green Premiksas
Katės Nr.: HCB5140A
„One Step RT-qPCR Syber Green Premix“ skirtas fluorescencijos kiekybiniam įvertinimui, pagrįstas SYBR Green I dažais.Naudojant genų specifinius pradmenis, atvirkštinės transkripcijos ir qPCR reakcijos užbaigiamos viename mėgintuvėlyje, todėl nebereikia kartoti dangtelio atidarymo ir pipetavimo operacijų, žymiai pagerinant tyrimo efektyvumą ir sumažinant užteršimo riziką.RNR mėginiams rinkinyje naudojama karščiui atspari atvirkštinė transkriptazė veiksmingai cDNR sintezei ir HotStart Taq DNR polimerazė kiekybiniam amplifikavimui.Naudojant optimizuotą buferio sistemą, rinkinio jautrumas gali būti iki 0,1 pg, kai taikiniai yra labai išreikšti, ir iki 1 pg, kai taikiniai yra vidutiniškai išreikšti.Rinkinys tinkamas DNR mėginių amplifikacijai ir kiekybiniam įvertinimui.Tai leidžia jautriai aptikti ir kiekybiškai įvertinti nukleino rūgštis iš skirtingų augalų ir gyvūnų mėginių, ląstelių ir mikroorganizmų.
Komponentai
| No | vardas | Apimtis | Apimtis |
| 1 | Išplėstinis buferis | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
| 2 | Išplėstinis fermentų mišinys | 20 μl | 200 μl |
| 3 | RNazė be H2O | 250 μl | 2 × 1,25 ml |
Laikymo sąlygos
Šis produktas turi būti laikomas -25–15 ℃ temperatūroje nuo šviesos 1 metus.
Instrukcijos
1.Reakcijos sistemos konfigūracijad
| Komponentai | Tūris (μL) | Tūris (μL) | Galutinė koncentracija |
| Išplėstinis buferis | 12.5 | 25 | 1× |
| Išplėstinis fermentų mišinys | 1 | 2 | - |
| Pirminis gruntas (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Atvirkštinis gruntas (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNR tamplatėb | X | X | - |
| RNazė be H2Oc | iki 25 | iki 50 | - |
Pastabos:
1) a.TGalutinė pradmenų koncentracija buvo 0,2 μmol/L, kurią taip pat galima atitinkamai pakoreguoti tarp 0,1 ir 1 μmol/L.
2) b.Reagentas yra ypač jautrus, jo bendroji RNR yra 1 pg–1 μg diapazone, o žmogaus mėginių tyrimas parodė, kad optimali įvestis yra 1 pg–100 ng, kontroliuojant bendrą Ct vertę 15–30 diapazone.
3) c.Norint užtikrinti tikslinio geno amplifikacijos pagrįstumą ir atkuriamumą, rekomenduojama naudoti 20 μL arba 50 μL.
4) d.Ruoškitės itin švariame stende ir naudokite antgalius bei reakcijos vamzdelius be nukleazės likučių;rekomenduojami antgaliai su filtrų kasetėmis.Venkite kryžminio užteršimo ir aerozolio.
2.Reakcijos programa
| Ciklo žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
| Atvirkštinė transkripcija | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Pradinė denatūracija | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikacijos reakcija | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Lydymosi kreivės stadija | Instrumento numatytosios nuostatos | 1 | |
Pastabos:
1) a.Atvirkštinės transkripcijos temperatūrą galima pasirinkti tarp 50-55°C, atsižvelgiant į eksperimentinius poreikius.DNR mėginiams atvirkštinės transkripcijos proceso galima praleisti.
2) b.Ypatingais atvejais atkaitinimo/pratęsimo temperatūrą galima reguliuoti pagal grunto Tm reikšmę, rekomenduojama 60°C.
Pastabos
1. Šis produktas skirtas tik moksliniams tyrimams.
2. Dėl savo saugumo dirbkite su laboratoriniais chalatais ir vienkartinėmis pirštinėmis.
