Multiplex One Step RT-qPCR premiksas-UNG
Katės Nr.: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) yra daugialypis kiekybinis PGR rinkinys, pagrįstas RNR kaip šablonu.Eksperimento metu tame pačiame mėgintuvėlyje buvo atlikta atvirkštinė transkripcija ir kiekybinė PGR, kas supaprastino eksperimentinę operaciją ir sumažino užteršimo riziką.Šiame rinkinyje pirmoji cDNR grandinė buvo efektyviai susintetinta karščiui atsparia atvirkštine transkriptaze ir kiekybiškai amplifikuota naudojant HotStart Tag DNR polimerazę.Rinkinyje daugiausia yra optimizuotas MP buferis, fermentų mišinys ir kt. Buferiniame tirpale jau yra Mg2+ir dNTP.Be to, pridedami veiksniai, kurie gali veiksmingai slopinti nespecifinę PGR amplifikaciją ir pagerinti kelių qPCR reakcijų amplifikacijos efektyvumą, kurie gali užtikrinti amplifikacijos efektyvumą ir atlikti iki kelių amplifikacijos reakcijų.dUTP/UDG sistema buvo pridėta siekiant veiksmingai užkirsti kelią aerozolio užteršimo rizikai.
Komponentai
1. Buferis
2. Fermentų mišinys
Specifikacija
| Karšta pradžia | Integruotas karštas paleidimas |
| Aptikimo metodas | Pradmenų-zondo aptikimas |
| PGR metodas | Vieno žingsnio RT-qPCR |
| Polimerazė | Taq DNR polimerazė |
| Mėginio tipas | DNR |
Laikymo sąlygos
Produktas siunčiamas su sausu ledu ir gali būti laikomas -25 ~ -15 ℃ 1 metus.Reikėtų vengti dažnaiužšaldymas-atšildymas.Rekomenduojama taupyti atskirai.
Instrukcijos
1.Reakcija Sistema
| Komponentai | Tūris (μL) | Galutinė koncentracija |
| 2 × MP buferis | 12.5 | 1× |
| Fermentų mišinys | 1 | - |
| Grunto/zondo mišinys (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Šablono RNR | 1-10 | - |
| RNazės neturintis H2O | iki 25 | - |
Pastabos:
Prieš naudodami būtinai gerai išmaišykite, venkite pernelyg didelių burbuliukų, kuriuos sukelia stipri vibracija.
a.Grunto koncentracija: Grunto mišinys, įskaitant multipleksinį gruntą, priklausomai nuo situacijos optimali grunto koncentracija gali būti nuo 0,l iki 1,0 μM.
b.Zodo koncentracija: zondo mišinys, apimantis daugkartinio zondo žymėjimo skirtumo fluorescencinę grupę, priklausomai nuo situacijos, optimali zondo koncentracija gali būti nuo 0,05 iki 0,5 μM.
c.Šablono skiedimas: qPCR yra labai jautrus, todėl rekomenduojama šabloną skiesti.Kontrolinė Ct vertė tinka nuo 20 iki 35.
d.Sistemos paruošimas: paruoškite ant itin švaraus darbo stalo, pipetės ir reakcijos vamzdelio be nukleazės likučių;rekomenduojama naudoti pistoleto galvutę su filtro elementu.Venkite kryžminio užteršimo ir aerozolio.
2. Optimizuotas važiavimas dviračiuprotokolas
| Ciklas žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
| Atvirkštinė transkripcija | 50 ℃a | 20 min | 1 |
| Pradinė-denatūracija | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikacijos reakcija | 95 ℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Pastabos:
a.Atvirkštinė transkripcija: Temperatūra gali būti 42°C arba 50°C.
b.Amplifikacijos reakcija: temperatūra reguliuojama pagal projektuojamų pradmenų Tm reikšmę.
c.Fluorescencinio signalo gavimas: nustatykite eksperimentinę procedūrą pagal prietaiso vadovo reikalavimus.
Pastabos
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą.
