Rnazės inhibitorius (be glicerolio)
Pelės RNazės inhibitorius yra rekombinantinis pelių RNazės inhibitorius, išreikštas ir išgrynintas iš E.coli.Jis jungiasi su RNaze A, B arba C santykiu 1:1 per nekovalentinį ryšį, taip slopindamas trijų fermentų aktyvumą ir apsaugodamas RNR nuo skilimo.Tačiau jis nėra veiksmingas prieš Aspergillus RNazę 1, RNazę T1, S1 Nukleazę, RNazę H arba Rnazę.Pelės RNazės inhibitorius buvo išbandytas RT-PGR, RT-qPCR ir IVT mRNR ir buvo suderinamas su įvairiomis komercinėmis atvirkštinėmis transkriptazėmis, DNR polimerazėmis ir RNR polimerazėmis.
Palyginti su žmogaus RNazės inhibitoriais, pelių RNazės inhibitorius neturi dviejų cisteinų, kurie būtų labai jautrūs oksidacijai, dėl kurios inhibitorius inaktyvuojamas.Dėl to jis stabilus esant mažoms DTT koncentracijoms (mažiau nei 1 mM).Dėl šios savybės jis tinkamas naudoti reakcijose, kuriose didelė DTT koncentracija yra neigiama reakcijai (pvz., Realaus laiko RT-PGR).
Ataikymas
Šis produktas gali būti plačiai naudojamas bet kokiame eksperimente, kuriame galima RNazės trukdžius, kad būtų išvengta RNR degradacijos, pavyzdžiui:
1.Pirmosios krypties cDNR sintezė, RT-PGR, RT-qPGR ir kt.;
2.Apsaugoti RNR nuo degradacijos in vitro transkripcijos/transliacijos metu (pvz., viruso replikacija in vitro);
3.RNazės aktyvumo slopinimas RNR išskyrimo ir gryninimo metu.
Laikymo sąlygos
Laikyti -25–15 ℃ temperatūroje;
Užšaldymo-atšildymo ciklai ≤ 5 kartus;
Galioja 1 metus.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip RNazės inhibitorių kiekis, reikalingas 5 ng RNazės A aktyvumui slopinti 50%.
Molekulinė masė
RNazės inhibitorius (be glicerolio) yra 50 kDa baltymas.
Kokybės kontrolė
Egzonukleazė Veikla:
Inkubuojant 40 U fermento su 1 μg λ-Hind III virškinamos DNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, DNR skaidymas neaptinkamas, kaip nustatyta gelio elektroforeze.
Endonukleazės aktyvumas:
Inkubuojant 40 U fermento su 1 μg λ DNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, DNR skaidymas neaptinkamas, kaip nustatyta gelio elektroforeze.
Nikinimas Veikla:
Inkubuojant 40 U fermento su 1 μg pBR322 16 valandų 37 ℃ temperatūroje, DNR skaidymas nebuvo aptinkamas, kaip nustatyta gelio elektroforeze.
RNazė Veikla:
Inkubuojant 40 U fermento su 1,6 μg MS2 RNR 4 valandas 37 ℃ temperatūroje, RNR nesuskaidė, kaip nustatyta gelio elektroforezės būdu.
E.coli DNR:
TaqMan qPCR aptinka 40 U fermento.E.coli DNR yra ≤ 0. 1pg/40U.
Npastabas
1. Nekratykite ir stipriai nemaišykite, kad išvengtumėte fermentų inaktyvavimo.
2.RNazės inhibitorius yra aktyvus nuo 25 ℃ iki 55 ℃ temperatūroje ir yra inaktyvuojamas esant ≥ 65 ℃.
3. RNazės H, RNazės 1 ir RNazės T1 aktyvumas nėra slopinamas.
4. RNAzės aktyvumo slopinimo pH diapazonas yra platus (aktyvus, kai pH 5-9), maksimalus aktyvumas rodomas esant 7-8 pH.
