2×HiF Taq plus Master Mix
Katės Nr.: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (su dažais) yra paruoštas naudoti 2 kartus iš anksto sumaišytas tirpalas, kuriame yra Plus HIF DNR polimerazės, dNTP ir optimizuotas buferis.Į pagrindinį mišinį pridedami du monokloniniai antikūnai kambario temperatūroje, slopinantys polimerazės aktyvumą ir 3′→5′ egzonukleazės aktyvumą, kad būtų galima lengvai ir labai specifinei Hot Start PGR.Pratęsimo faktorius pridedamas prie pagrindinio mišinio, kad fermentas gautų ilgo fragmento amplifikacijos pajėgumą, amplifikacijos ilgis gali būti iki 13 kb, fermentas turi 5′→3′ DNR polimerazės aktyvumą ir 3′→5′ egzonukleazės aktyvumas, jo tikslumas yra 83 kartus didesnis nei Taq DNR polimerazės, kuri yra 9 kartus didesnė nei įprastos DNR polimerazės.Jis tinka sudėtingiems šablonams sustiprinti, stiprinimo produktas yra bukas galas.
2 × HIF Taq plus Master Mix (su dažais) turi greito ir lengvo, didelio jautrumo, stipraus specifiškumo, gero stabilumo ir kt. privalumus, reakcijos sistemai tereikia pridėti pradmenų ir šablonų, o ją galima sustiprinti dviem žingsnių protokolas, supaprastinantis eksperimentinius veiksmus ir taupantis laiką.Šiame gaminyje yra elektroforezės indikatorių dažų, o PGR produktai gali būti naudojami tiesiogiai elektroforezei.Be to, gaminyje taip pat yra specialios apsauginės medžiagos, kad pagrindinis mišinys galėtų išlaikyti stabilų aktyvumą po pakartotinio užšaldymo-atšildymo.
Laikymo sąlygos
Produktai turi būti laikomi -25–15 ℃ temperatūroje 1 metus.
Specifikacijos
Produkto Aprašymas | Master Mix |
Koncentracija | 2× |
Karšta pradžia | Integruotas karštasis paleidimas |
Iškyša | Bukas |
Reakcijos greitis | Greitas |
Dydis (galutinis produktas) | Iki 13 kb |
Transportavimo sąlygos | Sausas ledas |
Produkto tipas | Aukšto tikslumo PGR premiksai |
Instrukcijos
1.PGR reakcijos sistema
Komponentai | Tūris (μL) |
DNR šablonas | Tinka |
Pirminis gruntas (10 μmol/L) | 2.5 |
Atvirkštinis gruntas (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | iki 50 |
2.Rekomenduojama naudoti skirtingus šablonus
Šablono tipas | Padidinkite fragmentus nuo 1 kb iki 10 kb |
Genominė DNR | 50 ng-200 ng |
Plazmidė arba virusinė DNR | 10pg-20ng |
cDNR | 1-2,5 µL (neviršykite 10 % galutinio PGR reakcijos tūrio) |
3.Stiprinimo protokolas
1) Dviejų žingsnių protokolas (sudėtingumo šablonas)
Ciklo žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
Pradinė denatūracija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denatūravimas | 98 ℃ | 10 sek | 30-35 |
Pratęsimas | 68℃ | 30 sek./kb | |
Galutinis pratęsimas | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Trijų žingsnių protokolas (įprastas protokolas)
Ciklo žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
Pradinė denatūracija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denatūravimas | 98 ℃ | 10 sek | 30-35 |
Atkaitinimas | 60 ℃ | 20 sek | |
Pratęsimas | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
Galutinis pratęsimas | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Atkaitinimo gradiento protokolas (sudėtingumo šablonas)
Ciklo žingsnis | Temperatūra | Laikas | Ciklai |
Pradinė denatūracija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
Denatūravimas | 98 ℃ | 10 sek | 15 (1 ℃ sumažinimas per ciklą) |
Gradientinis atkaitinimas | 70-55 ℃ | 20 sek | |
Pratęsimas | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
Denatūravimas | 98 ℃ | 10 sek |
20 |
Atkaitinimas | 55 ℃ | 20 sek | |
Pratęsimas | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
Galutinis pratęsimas | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Funkcijos pagal skirtingus stiprinimo protokolus
Protocol | Dviejų žingsnių | Trijų žingsnių | Gradientinis atkaitinimas |
Spec. | greitai | vidutinis | lėtas |
Specifiškumas | aukštas | vidutinis | aukštas |
PGR išeiga | vidutinis | aukštas | vidutinis |
Aptikimo greitis | aukštas | vidutinis | aukštas |
Pastabos
Dėvėkite reikiamas AAP, tokį laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!