2 × PCR pagrindinis mišinys (be dažų)
PCR Master Mix yra įprastas PGR iš anksto sumaišytas tirpalas, kuris yra paruoštas naudoti, įskaitant Taq DNR polimerazę, dNTP mišinį MgCl2 ir optimizuotą buferį.Reakcijos metu amplifikacijai galima pridėti tik pradmenį ir šabloną, o tai labai supaprastina eksperimento veiksmus.Šiame gaminyje yra puikių stabilizatorių ir jis gali būti laikomas 3 mėnesius 4 ℃ temperatūroje.PGR produktas turi 3′-dA išsikišimą ir gali būti lengvai klonuojamas į T vektorių.
Laikymo sąlygos
Produktas turi būti laikomas -25 ℃ ~ -15 ℃ temperatūroje dvejus metus.
Specifikacijos
| Ištikimybė (palyginti su Taq) | 1× |
| Karšta pradžia | No |
| Iškyša | 3′-A |
| Polimerazė | Taq DNR polimerazė |
| Reakcijos formatas | SuperMix arba Master Mix |
| Reakcijos greitis | Standartinis |
| produkto tipas | PCR pagrindinis mišinys (2×) |
Instrukcijos
1.Reakcijos sistema
| Komponentai | Dydis (μL) |
| DNR šablonas | Tinka |
| 1 gruntas (10 μmol/L) | 2 |
| 2 gruntas (10 μmol/L) | 2 |
| PCR pagrindinis mišinys | 25 |
| ddH2O | Iki 50 |
2.Stiprinimo protokolas
| Ciklo žingsniai | Temperatūra (°C) | Laikas | Ciklai |
| Išankstinė denatūracija | 94 ℃ | 5 min | 1 |
| Denatūravimas | 94 ℃ | 30 sek | 35 |
| Atkaitinimas | 50-60 ℃ | 30 sek | |
| Pratęsimas | 72 ℃ | 30-60sek/kb | |
| Galutinis pratęsimas | 72 ℃ | 10 min | 1 |
Pastabos:
1) Šablonų naudojimas: 50-200 ng genominės DNR;0,1-10 ng plazmidinės DNR.
2) Mg2+koncentracija: Šiame produkte yra 3 mM MgCl2, tinkamo daugeliui PGR reakcijų.
3) Atkaitinimo temperatūra: žr. teorinę gruntų Tm vertę.Atkaitinimo temperatūrą galima nustatyti 2-5 ℃ žemesnę nei teorinė grunto vertė.
4) Pratęsimo laikas: molekuliniam identifikavimui rekomenduojama 30 sek./kb.Dėl genų klonavimo, 60sek./kb.
Pastabos
1.Dėl savo saugumo ir sveikatos dirbdami dėvėkite laboratorinius chalatus ir vienkartines pirštines.
2.Tik moksliniams tyrimams!
