UDG/UNG fermentai
UDG (uracilo DNR glikozilazė) gali katalizuoti N-glikozidinio ryšio tarp uracilo bazės ir cukraus-fosfato pagrindo hidrolizę ssDNR ir dsDNR.Jis gali lengvai kontroliuoti aerozolių taršą ir yra tinkamas įprastoms molekulinės biologijos sistemoms, tokioms kaip PGR, qPCR, RT-qPCR ir LAMP.
Specifikacijos
| Išraiškos priegloba | Rekombinantinis E. coli su uracilo DNR glikozilazės genu |
| Molekulinė masė | 24. 8 kDa |
| Grynumas | ≥ 95 % (SDS-PAGE) |
| Šilumos inaktyvavimas | 95 ℃, 5–10 min |
| Vieneto apibrėžimas | Vienas vienetas (U) apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kurio reikia 1 μg dU turinčios dsDNR hidrolizei katalizuoti per 30 minučių 25 ℃ temperatūroje. |
Sandėliavimas
Produktas turi būti laikomas -25℃ ~ -15°C temperatūroje dvejus metus.
Instrukcijos
1.PGR reakcijos mišinio paruošimas pagal šią sistemą
| Komponentai | Tūris (μL) | Galutinė koncentracija |
| 10 × PGR buferis (Mg² + plius) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/l) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP / dGTP / dATP / dTTP (10 mmol / išplovimas) | 1 | 0,2 mmol/išplovimas |
| DNR šablonas | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| 2 gruntas (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNR polimerazė (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracilo DNR glikozilazė (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Iki 50 | - |
Pastaba: Pagal eksperimentinius reikalavimus galutinė dUTP koncentracija gali būti reguliuojama tarp 0,2-0,6 mmol/L, o dTTP galima pridėti pasirinktinai 0,2 mmol/L.
2.Amplifikacijos procedūra
| Ciklo žingsnis | Temperatūra | Laikas | Ciklai |
| dU turinčio šablono degradacija | 25℃ | 10 min | 1 |
| UDG aktyvinimas, šablono pradinis denatūravimas | 95 ℃ | 5 ~ 10 min | 1 |
| Denatūravimas | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 |
| Atkaitinimas | 60 ℃ | 20 sek | |
| Pratęsimas | 72 ℃ | 30 sek./kb | |
| Galutinis pratęsimas | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Pastaba: Reakcijos laikas 25°C temperatūroje gali būti reguliuojamas per 5-10 min., atsižvelgiant į eksperimentinius reikalavimus.
Pastabos
1.UDG yra aktyvus daugumoje PGR reakcijos buferių.
2.Naudojami fermentai turi būti laikomi šaldytuve arba ledo vonioje, o panaudojus nedelsiant –20°C temperatūroje.
3.Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!
