RT-LEMPA Colormetric Master Mix HCB5204A
Šiame gaminyje yra reakcijos buferio, RT-Enzymes Mix (Bst DNR polimerazė ir karščiui atspari atvirkštinė transkriptazė), liofilizuotų apsauginių medžiagų ir chromogeninių dažų komponentų.Norėdami naudoti, tiesiog naudokite buferį, reakcijos fermentas ir gruntas sumaišomi ir pridedami prie šablono;liofilizuotos apsauginės medžiagos pridėjimas gali būti tiesus.Jis buvo prijungtas prie liofilizatoriaus ir liofilizuotas, o naudojant buvo pridėti tik pradmenys ir šablonai.Šis rinkinys užtikrina greitą ir aiškų vizualinį amplifikacijos aptikimą, kuri neigiama reakcija yra pažymėta raudona spalva, o teigiama reakcija nurodoma pakeitus geltona spalva.
Komponentas
| Komponentas | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Ciklinis stiprinimo buferis (su dažais) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 ml × 10 |
| RT-fermentų mišinys | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml × 10 |
| Liofilizuota apsauginė priemonė | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Programos
DNR arba RNR izoterminiam amplifikacijai.
Laikymo sąlygos
Gabenamas su sausu ledu, laikomas -25 ~ -15 ℃ temperatūroje.Venkite dažno užšaldymo-atšildymo, produktas galioja 12 mėnesių.
protokolas
1.Atšildykite naudojamą reakcijos buferį kambario temperatūroje.Trumpai sumaišykite arba keletą kartų apverskite mėgintuvėlius, kad gerai susimaišytų, tada centrifuguokite, kad skystis surinktų į mėgintuvėlio dugną.
2.Reakcijos sistemos paruošimas.Šis reagentas gali būti paruoštas dviem reakcijų sistemomis: skystu reakcijos mišiniu ir liofilizuotu sistemos mišiniu.
1) Paruoškite skystą reakcijos mišinį
| Komponentas | Apimtis |
| Ciklinis stiprinimo buferis (su dažais) | 10 μl |
| RT-fermentų mišinys | 2,8 μl |
| 10 × Grunto mišinysa | 5 μl |
| DNR/RNR šablonai b | × μL |
| Vanduo be branduolių | Iki 50 μl |
2) Liofilizacijos sistemos mišinys
① Paruoškite liofilizuotą mišinį
| Komponentas | Apimtis |
| Ciklinis stiprinimo buferis (su dažais) | 10 μl |
| Liofilizuota apsauginė priemonė | 20 μl |
| RT-fermentų mišinys | 2,8 μl |
| Vanduo be branduolių | Iki 50 μl |
② Liofilizavimas: paruoštas mišinys buvo liofilizuotas 50 μl sistemoje
③ Paruoškite reakcijos mišinį
| Komponentas | Apimtis |
| Liofilizuotas mišinys | 1 gabalėlis |
| 10 × Grunto mišinysa | 5 μl |
| DNR/RNR šablonai b | × μL |
| Vanduo be branduolių | Iki 50 μl |
Pastabos:
1) a.10 × pradmenų mišinys: 16 μM FIP / BIP, 2 μM F3 / B3, 4 μM kilpa F/B;
2) b.DEPC (vandenyje tirpus) rekomenduojamas nukleino rūgščių templ.
1.Inkubuokite 65°C temperatūroje 30-45 min., kuri gali būti atitinkamai pratęsta, atsižvelgiant į spalvos pasikeitimą. Reakcijos laikas.
2.Žiūrint plika akimi, geltona buvo teigiama, o raudona – neigiama.
Pastabos
1.Druskos gali atsirasti buferinio vamzdelio apačioje, trumpai pasukite arba kelis kartus apverskite mėgintuvėlius, kad gerai susimaišytų kambario temperatūroje.
2.Reakcijos temperatūra gali būti optimizuota nuo 62 ℃ iki 68 ℃, atsižvelgiant į pradmenų būklę.
3.Supakuoti reagentai neturi būti ilgą laiką veikiami oro.
4.Raudonos ir geltonos spalvos pasikeitimo reakcija priklauso nuo reakcijos sistemos pH pokyčio, prašome nenaudoti Tris nukleorūgščių laikymo tirpalo, rekomenduojama naudoti ddH2O saugomos nukleino rūgšties;
5.Eksperimentas turi būti standartizuotas, įskaitant reakcijos sistemos paruošimą, liofilizavimą ir mėginio apdorojimą bei mėginio pridėjimo procesą;
6.Siekiant išvengti užteršimo, reakcijos sistemą rekomenduojama paruošti itin švariame stende, kituose Pridėkite šablonus prie patalpos gartraukio, kad išvengtumėte klaidingų teigiamų trukdžių.
