Proteinazė K NGS (milteliai)

Specifikacija

Savybės

Vieneto apibrėžimas

Vienas NGS proteazės K vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, reikalingas kazeinui hidrolizuoti į 1 μmol L-tirozino standartinėmis nustatymo sąlygomis.

 Reagentų paruošimas

I reagentas:

Substratas: 1% kazeino iš galvijų pieno tirpalo: ištirpinkite 1 g galvijų pieno kazeino 50 ml 0,1 M natrio fosfato tirpalo, pH 8,0, kaitinkite vandens vonioje 65-70 °C temperatūroje 15 min., išmaišykite ir ištirpinkite, atvėsinkite vandeniu, sureguliuokite natrio hidroksido iki pH 8,0 ir praskieskite iki 100 ml.

Reagentas II:

TCA tirpalas: 0,1 M trichloracto rūgšties, 0,2 M natrio acetato ir 0,3 M acto rūgšties (pasverkite 1,64 g trichloracto rūgšties + 1,64 g natrio acetato + 1,724 ml acto rūgšties, įpilkite 50 ml dejonizuoto vandens, sureguliuokite pH iki 4,0 iki HCl. 100 ml).

Reagentas III:

0,4 m natrio karbonato tirpalas (pasverkite 4,24 g bevandenio natrio karbonato ir ištirpinkite 100 ml vandens)

IV reagentas:

Folino fenolio reagentas: praskieskite 5 kartus dejonizuotu vandeniu.

Reagentas V:

Fermentų skiediklis: 0,1 M natrio fosfato tirpalas, pH 8,0.

VI reagentas:

L-tirozino etaloninis tirpalas: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-tirozinas, ištirpintas 0,2 M HCl.

Procedūra

1. Įjunkite UV-Vis spektrofotometrą ir pasirinkite fotometrinį matavimą.

2. Nustatykite bangos ilgį kaip 660 nm.

3. Įjunkite vandens vonią, nustatykite temperatūrą iki 37 ℃, 3-5 minutes palaikykite nepakitusią temperatūrą.

4. Iš anksto pašildykite 0,5 ml substrato 2 ml centrifugos mėgintuvėlyje 37 ℃ vandens vonioje 10 min.

5. Ištraukite 0,5 ml praskiesto fermento tirpalo į pašildytą centrifugos mėgintuvėlį 10 minučių.Nustatykite fermento skiediklį kaip tuščiąją grupę.

6. Įpilkite 1,0 mL TCA reagento iškart po reakcijos.Gerai išmaišykite ir inkubuokite vandens vonioje 30 minučių.