Hotstart Taq DNR polimerazė (5 v/ul)
Taq DNA polimerazė yra karšto paleidimo DNR polimerazė, dvigubai blokuojanti dvigubus antikūnus. Šis produktas ne tik blokuoja Taq DNR polimerazės 5′→3′ polimerazės aktyvumą, bet ir blokuoja 5′→3′eksonukleazės aktyvumą.Šildymas 30 sekundžių priešdenatūravimo temperatūroje gali visiškai inaktyvuoti antikūną ir atpalaiduoti DNR polimerazės ir egzonukleazės aktyvumą.Dvigubo blokavimo charakteristika gali ne tik veiksmingai užkirsti kelią nespecifiniam amplifikacijai, kurią sukelia neatitikimas arba pradmenų dimeras, bet ir veiksmingai slopinti fluorescencinio signalo mažėjimą, kurį sukelia zondo degradacija, kad in vitro aptikimo reagentas būtų stabilesnis transportuojant ar naudojant kambaryje. temperatūros.
Komponentai
| Komponentas | HC1012B (250 U) | HC1012B (1000 U) | HC1012B (10 000 U) | HC1012B (25 000 U) |
| Taq DNR polimerazė(5 U/μL) | 50 μl | 200 μl | 2 ml | 5 ml |
Sandėliavimo būklė
Produktas siunčiamas su sausu ledu ir gali būti laikomas -25°C ~ -15°C temperatūroje 2 metus.
Specifikacijos
| Polimerazė | Taq DNR polimerazė |
| Grynumas | ≥ 95 % (SDS-PAGE) |
| Karšta pradžia | Integruotas karštasis paleidimas |
| Reakcijos greitis | Standartinis |
| Egzonukleazės aktyvumas | 5′→3′ |
Instrukcijos
Reakcijos sąranka
| Komponentai | Apimtis (μL) | Galutinė koncentracija |
| 2 × buferisa | 25 | 1× |
| Grunto/zondo mišinysb | × | 0,1 μmol/L-0,5 μmol/L |
| Hotstart Taq polimerazė (5U/μL) | 1.2 | 0,12 U/μL |
| DNR šablonasc | × | 0,1-100 ng |
| ddH2O | Iki 50 | - |
Pastabos:
1) Atsižvelgiant į konkretų eksperimentinį pritaikymą, reikia paruošti atitinkamą reakcijos buferį.
2) DNR kiekis ir zondų arba pradmenų koncentracija yra rekomenduojamos koncentracijos.Optimali koncentracija gali būti koreguojama atsižvelgiant į konkrečias eksperimento sąlygas.
Šiluminio dviračio protokolas
| Žingsnis | Temperatūra(°C) | Laikas | Ciklai |
| Išankstinė denatūracija | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denatūravimas | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Atkaitinimas / pratęsimas | 60 ℃a | 30 sekb |
Pastabos:
1) Reakcijos temperatūra reguliuojama pagal projektuojamų pradmenų Tm reikšmę.
2) Skirtingiems qPCR instrumentams reikia skirtingo fluorescencinio signalo gavimo laiko, nustatykite pagal trumpiausią laiko ribą.
Pastabos
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!
