DNazė I (be Rnazės) (5 u/ul)
Katės Nr.: HC4007A
DNazė I (dezoksiribonukleazė I) yra endodezoksiribonukleazė, galinti virškinti viengrandę arba dvigrandę DNR.Jis atpažįsta ir suskaido fosfodiesterio ryšius, kad gautų monodeoksinukleotidus arba viengrandžius oligodeoksinukleotidus su fosfato grupėmis 5'-gale ir hidroksilo grupėmis 3'-gale.DNazės I aktyvumas priklauso nuo Ca2+ir gali būti aktyvuojamas dvivalenčių metalų jonų, tokių kaip Mn2+ir Zn2+.5 mM Ca2+apsaugo fermentą nuo hidrolizės.Esant Mg2+, fermentas gali atsitiktinai atpažinti ir suskaidyti bet kurią vietą bet kurioje DNR grandinėje.Dalyvaujant Mn2+, dvigubos DNR grandinės gali būti vienu metu atpažintos ir suskaldytos beveik toje pačioje vietoje, kad susidarytų plokščio galo DNR fragmentai arba lipniojo galo DNR fragmentai, išsikišę 1–2 nukleotidai.
Komponentai
| vardas | 0,1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNazė I, be Rnazės | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I buferis | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Laikymo sąlygos
-25 ℃ ~ -15 ℃ saugojimui;Transportavimas po ledo paketais.
Instrukcijos
1. Paruoškite reakcijos tirpalą mėgintuvėlyje be RNazės pagal toliau nurodytas proporcijas:
| Komponentas | Apimtis |
| RNR | X µg |
| 10 × DNazės I buferis | 1 μl |
| DNazė I, be RNazės (5 U/μL) | 1 U/µg RNR① |
| ddH2O | Iki 10 μl |
Pastaba: ①Apskaičiuokite DNazės I tūrį, kurį reikia pridėti pagal RNR kiekį.
2. 37 ℃ 15 minučių;
3. Įpilkite 0,5 M EDTA iki galutinės koncentracijos 2,5 mM ~ 5 mM ir kaitinkite 65 ℃ temperatūroje 10 minučių, kad sustabdytumėte reakciją.Mėginys gali būti tiesiogiai naudojamas kitai reakcijai, pavyzdžiui, atvirkštinei transkripcijaieksperimentas.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kuris visiškai suardys 1 µg pBR322DNR per 10 minučių 37 ℃ temperatūroje.
Kokybės kontrolė
RNazė:5 U DNazės I su 1,6 µg MS2 RNR 4 valandas 37 ℃ temperatūroje nedegraduoja, nesnustatomas agarozės gelio elektroforezės būdu.
Pastabos
1. 0,5MEDTA paruoškite patys.
2. Naudokite 1 U DNazės I vienam µg RNR.Tačiau jei RNR yra mažesnė nei 1 µg, naudokite 1U DNase I.
3. Darbo metu padėkite fermentą ant ledo.
