Bst 2.0 DNR polimerazė (be glicerolio, didelio tankio)
Bst DNR polimerazė V2 yra gauta iš Bacillus stearothermophilus DNR polimerazės I, kuri pasižymi 5′→3′ DNR polimerazės aktyvumu ir stipriu grandinės pakeitimo aktyvumu, bet neturi 5′→3′ egzonukleazės aktyvumo.Bst DNA polimerazė V2 idealiai tinka grandinės perkėlimui, izoterminiam amplifikacijai LAMP (Loop mediated izothermal amplifikacija) ir greitam sekos nustatymui.Ši Bst DNR polimerazė V2 gali slopinti DNR polimerazės aktyvumą kambario temperatūroje, kad ją būtų galima eksploatuoti ir reakcijos sistemą sudaryti kambario temperatūroje, užkertant kelią nespecifiniam amplifikacijai ir pagerinant reakcijos efektyvumą, o ši versija gali būti liofilizuotam.Be to, jis gali išlaisvinti savo aktyvumą aukštesnėje temperatūroje, todėl nereikia atskiro aktyvinimo žingsnio.
Komponentai
| Komponentas | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNR polimerazė V2 (be glicerolio) (32 V/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Programos
1.LAMP izoterminis stiprinimas
2.Vienos DNR grandinės poslinkio reakcija
3.Aukšta GC genų seka
4.DNR sekos nustatymas nanogramų lygyje.
Sandėliavimo būklė
Transportuoti žemesnėje nei 0°C temperatūroje ir laikyti -25°C~-15°C temperatūroje.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kuris per 30 minučių 65 °C temperatūroje įtraukia 25 nmol dNTP į rūgštyje netirpią medžiagą.
LAMP reakcija
| Komponentai | 25 μLSistema |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (kiekvienas po 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μl |
| Grunto mišinysb | 6 μl |
| Bst DNR polimerazė V2 (be glicerolio) (32 V/ul) | 0,25 μl |
| Šablonas | × μL |
| ddH₂O | Iki 25 μl |
Pastabos:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): pagal eksperimentinius poreikius kaip pakaitalus galima naudoti kitus dažus;
2) b.Grunto mišinys: gaunamas sumaišius 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB ir kitus tūrius.
Reakcija ir būklė
1 × HC Bst V2 buferis, inkubavimo temperatūra yra nuo 60 °C iki 65 °C.
Šilumos inaktyvavimas
80°C, 20 min.
