Bst 2.0 DNR polimerazė (be glicerolio)
Bst DNR polimerazė V2 yra gauta iš Bacillus stearothermophilus DNR polimerazės I, kuri pasižymi 5′→3′ DNR polimerazės aktyvumu ir stipriu grandinės pakeitimo aktyvumu, bet neturi 5′→3′ egzonukleazės aktyvumo.Bst DNA polimerazė V2 idealiai tinka grandinės perkėlimui, izoterminiam amplifikacijai LAMP (Loop mediated izothermal amplifikacija) ir greitam sekos nustatymui.
Komponentai
| Komponentas | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (be glicerolio) (8 U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Programos
1.LEMPOS izoterminis stiprinimas
2.DNR grandinės vienos poslinkio reakcija
3.High GC genų sekvenavimas
4. nanogramų lygio DNR sekos nustatymas.
Sandėliavimo būklė
Transportuoti žemesnėje nei 0°C temperatūroje ir laikyti -25°C~-15°C temperatūroje.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kuris per 30 minučių 65 °C temperatūroje įtraukia 25 nmol dNTP į rūgštyje netirpią medžiagą.
Kokybės kontrolė
1.Baltymų grynumo tyrimas (SDS-PAGE):Bst DNR polimerazės V2 grynumas yra ≥99 %, nustatytas SDS-PAGE analize naudojant Coomassie Blue aptikimą.
2.Egzonukleazės aktyvumas:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1 μg λ-Hind Ⅲ virškinamos DNR 16 valandų 37 ℃ temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
3.Nikazės veikla:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1 μg pBR322 DNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
4.RNazės veikla:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1,6 μg MS2 RNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
5.E. coli DNR:120 U Bst DNR polimerazės V2 patikrinama, ar nėra E. coli genominės DNR, naudojant TaqMan qPCR su pradmenimis, specifiniais E. coli 16S rRNR lokusui.E. coli genomo DNR užterštumas yra ≤1 kopija.
LAMP reakcija
| Komponentai | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (kiekvienas po 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μl |
| Grunto mišinysb | 6 μl |
| Bst DNR polimerazė V2 (be glicerolio) (8 U/ul) | 1 μl |
| Šablonas | × μL |
| ddH₂O | Iki 25 μl |
Pastabos:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): pagal eksperimentinius poreikius kaip pakaitalus galima naudoti kitus dažus;
2) b.Grunto mišinys: gaunamas sumaišius 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB ir kitus tūrius.
Reakcija ir būklė
1 × HC Bst V2 buferis, inkubavimo temperatūra yra nuo 60 °C iki 65 °C.
Šilumos inaktyvavimas
80 °C, 20 min
