Warm Start Bst 2.0 DNR polimerazė (be glicerolio)
Bst DNR polimerazė V2 yra gauta iš Bacillus stearothermophilus DNR polimerazės I, kuri pasižymi 5′→3′ DNR polimerazės aktyvumu ir stipriu grandinės pakeitimo aktyvumu, bet neturi 5′→3′ egzonukleazės aktyvumo.Bst DNA polimerazė V2 idealiai tinka grandinės perkėlimui, izoterminiam amplifikacijai LAMP (Loop mediated izothermal amplifikacija) ir greitam sekos nustatymui.Bst DNR polimerazė V2 yra karšto paleidimo versija, pagrįsta Bst DNR polimeraze V2 (HC5005A), gauta grįžtamojo modifikavimo technologija, kuri gali slopinti DNR polimerazės aktyvumą kambario temperatūroje, todėl reakcijos sistemą galima valdyti ir formuoti kambario temperatūroje, kad būtų išvengta -specifinis stiprinimas ir pagerina reakcijos efektyvumą, o ši versija gali būti liofilizuota.Be to, jo aktyvumas išsiskiria esant aukštai temperatūrai, todėl nereikia atskiro aktyvinimo žingsnio.
Komponentai
| Komponentas | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNR polimerazė V2 (be glicerolio) (8 U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Programos
1.LAMP izoterminis stiprinimas
2.Vienos DNR grandinės poslinkio reakcija
3.Aukšta GC genų seka
4.DNR sekos nustatymas nanogramų lygyje.
Sandėliavimo būklė
Transportuoti žemesnėje nei 0°C temperatūroje ir laikyti -25°C~-15°C temperatūroje.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kuris per 30 minučių 65 °C temperatūroje įtraukia 25 nmol dNTP į rūgštyje netirpią medžiagą.
Kokybės kontrolė
1.Baltymų grynumo tyrimas (SDS-PAGE):Bst DNR polimerazės V2 grynumas yra ≥99 %, nustatytas SDS-PAGE analize naudojant Coomassie Blue aptikimą.
2.EndonukleazėVeikla:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1 μg λDNR, 16 valandų 37 ℃ temperatūroje, kaip nustatyta, degradacija neaptinkama.
3.Egzonukleazės aktyvumas:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1 μg λ-Hind Ⅲ virškinamos DNR 16 valandų 37 ℃ temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
4.Nikazės veikla:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1 μg pBR322 DNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
5.RNazės veikla:Inkubuojant 50 μL reakciją, kurioje yra mažiausiai 8 U Bst DNR polimerazės V2 su 1,6 μg MS2 RNR 16 valandų 37 °C temperatūroje, skilimas neaptinkamas, kaip nustatyta.
6.E. coliDNR:120 U Bst DNR polimerazės V2 patikrinama, ar nėra E. coli genominės DNR, naudojant TaqMan qPCR su pradmenimis, specifiniais E. coli 16S rRNR lokusui.E. coli genomo DNR užterštumas yra ≤1 kopija.
LAMP reakcija
| Komponentai | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 buferis | 2,5 μl |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μl |
| dNTP (kiekvienas po 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μl |
| Grunto mišinysb | 6 μl |
| Bst DNR polimerazė V2 (be glicerolio) (8 U/ul) | 1 μl |
| Šablonas | × μL |
| ddH₂O | Iki 25 μl |
Pastabos:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): pagal eksperimentinius poreikius kaip pakaitalus galima naudoti kitus dažus;
2) b.Grunto mišinys: gaunamas sumaišius 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB ir kitus tūrius.
Reakcija ir būklė
1 × HC Bst V2 buferis, inkubavimo temperatūra yra nuo 60 °C iki 65 °C.
Šilumos inaktyvavimas
80°C, 20 min
