Viruso DNR/RNR ekstrahavimo rinkinys
Šis rinkinys tinka greitam didelio grynumo viruso DNR/RNR ekstrahavimui iš mėginių, tokių kaip nosiaryklės tamponai, aplinkos tamponai, ląstelių kultūros supernatantai ir audinių homogenato supernatantai.Rinkinys pagrįstas silicio dioksido membranos gryninimo technologija, kuri pašalina poreikį naudoti fenolio/chloroformo organinius tirpiklius arba daug laiko atimantį alkoholio nusodinimą, norint išskirti aukštos kokybės virusinę DNR/RNR.Gautos nukleorūgštys yra be priemaišų ir paruoštos naudoti tolesniuose eksperimentuose, tokiuose kaip atvirkštinė transkripcija, PGR, RT-PGR, realaus laiko PGR, naujos kartos sekos nustatymas (NGS) ir Northern blot.
Laikymo sąlygos
Laikyti 15 ~ 25 ℃ temperatūroje ir transportuoti kambario temperatūroje
Komponentai
| Komponentai | 100RXNS |
| Buferis VL | 50 ml |
| Buferis RW | 120 ml |
| Be RNazės ddH2O | 6 ml |
| FastPure RNA stulpeliai | 100 |
| Surinkimo tūbelės (2ml) | 100 |
| RNazės neturintys surinkimo mėgintuvėliai (1,5 ml) | 100 |
Buferis VL:Sukurkite aplinką lizei ir surišimui.
Buferis RW:Pašalinkite likusius baltymus ir kitas priemaišas.
Be RNazės ddH2O:Iš membranos išplaukite DNR/RNR sukimosi kolonėlėje.
FastPure RNA stulpeliai:Konkrečiai adsorbuokite DNR/RNR.
Surinkimo tūbelės 2 ml:Surinkite filtratą.
RNazės neturintys surinkimo mėgintuvėliai 1,5 ml:Surinkite DNR/RNR.
Programos
Nosiaryklės tamponai, aplinkos tamponai, ląstelių kultūros supernatantai ir audinių homogenato supernatantai.
Savarankiškai paruošta medžiagaials
Pipečių antgaliai be RNazės, 1,5 ml RNazės neturintys centrifugos mėgintuvėliai, centrifuga, sūkurinis maišytuvas ir pipetės.
Eksperimento procesas
Atlikite visus toliau nurodytus veiksmus biologinės saugos spintoje.
1. Įpilkite 200 μl mėginio į centrifugos mėgintuvėlį, kuriame nėra RNazės (jei mėginio nepakanka, užpildykite PBS arba 0,9 % NaCl), įpilkite 500 μl buferio VL, gerai išmaišykite maišydami 15–30 sekundžių ir centrifuguokite. trumpai, kad mišinys surinktų vamzdelio apačioje.
2. Įdėkite FastPure RNA kolonėles į surinkimo mėgintuvėlius 2 ml.Perkelkite mišinį iš 1 etapo į FastPure RNA kolonėles, centrifuguokite 12 000 aps./min (13 400 × g) greičiu 1 minutę ir filtratą išmeskite.
3. Į FastPure RNA kolonėles įpilkite 600 μl buferio RW, centrifuguokite 12 000 aps./min (13 400 × g) 30 sekundžių ir išmeskite filtratą.
4. Pakartokite 3 veiksmą.
5. Centrifuguokite tuščią kolonėlę 12 000 aps./min (13 400 × g) 2 min.
6. Atsargiai perkelkite FastPure RNA Columns į naujus 1,5 ml surinkimo mėgintuvėlius be RNazės (yra rinkinyje) ir į membranos centrą įpilkite 30–50 μl ddH2O be RNazės neliesdami kolonėlės.Leiskite pastovėti kambario temperatūroje 1 minutę ir centrifuguokite 12 000 aps./min (13 400 × g) 1 min.
7. Išmeskite FastPure RNA stulpelius.DNR/RNR gali būti naudojama tiesiogiai tolesniems tyrimams arba trumpą laiką laikoma -30–15 °C temperatūroje arba ilgesnį laiką –85–65 °C temperatūroje.
Pastabos
Tik moksliniams tyrimams.Nenaudoti diagnostikos procedūroms.
1. Iš anksto subalansuokite mėginius iki kambario temperatūros.
2. Virusai yra labai užkrečiami.Prieš eksperimentą įsitikinkite, kad buvo imtasi visų būtinų saugos priemonių.
3. Venkite pakartotinio mėginio užšaldymo ir atšildymo, nes dėl to gali suirti arba sumažėti ekstrahuotos virusinės DNR/RNR išeiga.
4. Savarankiškai paruoštą įrangą sudaro pipetės antgaliai be RNazės, 1,5 ml RNazės neturintys centrifugos mėgintuvėliai, centrifuga, sūkurinis maišytuvas ir pipetės.
5. Naudodami rinkinį dėvėkite laboratorinį chalatą, vienkartines latekso pirštines ir vienkartinę kaukę bei naudokite eksploatacines medžiagas, kuriose nėra RNazės, kad sumažintumėte RNazės užteršimo riziką.
6. Atlikite visus veiksmus kambario temperatūroje, jei nenurodyta kitaip.
Mechanizmas ir darbo eiga
