Ultra Nuclease GMP klasės
Katės Nr.: HC2016A
UltraNuclease GMP klasės yra ekspresuojamos ir išgrynintos Escherichia coli (E.coli), genetiškai modifikuotos ir paruoštos GMP aplinkoje.Jis gali sumažinti ląstelių supernatanto ir ląstelių lizato klampumą atliekant mokslinius tyrimus, padidinti baltymų valymo efektyvumą ir pagerinti baltymų funkcinius tyrimus.Produktas taip pat gali sumažinti šeimininko nukleorūgščių likučius iki pg lygio, pagerindamas biologinių produktų, įskaitant virusų valymą, vakcinų gamybą ir baltymų / polisacharidų farmacijos gamybą, veikimą ir saugą.Be to, produktas taip pat gali būti naudojamas siekiant užkirsti kelią žmogaus periferinio kraujo mononuklearinių ląstelių (PBMC) susikaupimui ląstelių terapijos ir vakcinos kūrimo metu.
UltraNuclease tiekiama sterilizuoto reagento pavidalu, eliuuojama buferyje (20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50 % glicerino), atrodo kaip bespalvis, skaidrus skystis.Šis produktas gaminamas pagal GMP proceso reikalavimus ir pateikiamas skysto pavidalo.
Komponentai
UltraNuclease GMP klasės (250 U/μL)
Laikymo sąlygos
Produktas siunčiamas su sausu ledu ir gali būti laikomas -25℃~-15°C temperatūroje dvejus metus.
Jei produktas atidarytas ir buvo laikomas 4 ℃ ilgiau nei savaitę, rekomenduojame filtruotiproduktą, kad būtų išvengta mikrobinio užteršimo.
Specifikacijos
| Išraiškos priegloba | Rekombinantinis E. coli su UltraNuclease genu |
| Molekulinė masė | 26,5 kDa |
| elektros taškas | 6.85 |
| Grynumas | ≥99 % (SDS-PAGE) |
| Saugojimo buferis | 20 mM Tris-HCL pH 8,0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50 % glicerino |
|
Vieneto apibrėžimas | Vieno aktyvumo vieneto (U) apibrėžimas yra naudojamas fermento kiekispakeiskite ΔA260 absorbcijos vertę 1,0 per 30 minučių 2, 625 mlreakcijos sistema 37 ℃ temperatūroje, o pH 8,0 (atitinka visišką virškinimą37 μg lašišos spermos DNR į oligonukleotidus). |
Instrukcijos
1. Pavyzdys Kolekcija
Prilipusios ląstelės: pašalinkite terpę, nuplaukite ląsteles PBS ir pašalinkite supernatantą.
Suspensijos ląstelės: surinkite ląsteles centrifuguojant, nuplaukite ląsteles PBS, centrifuguokite 600010 min., surinkite granulę.
Escherichia coli: surinkite bakterijas centrifuguojant, vieną kartą nuplaukite PBS, centrifuguokite 8000aps./min. 5 min. ir surinkite granulę.
2. Mėginio apdorojimas
Surinktas ląstelių nuosėdas apdorokite lizės buferiu masės (g) ir tūrio (mL) santykiu 1: (10-20) arba mechaniniais ar cheminiais metodais ant ledo arba kambario temperatūroje (1 g ląstelių nuosėdų yra apie
109 langeliai).
3. Gydymas fermentais
Į reakcijos sistemą įpilkite 1–5 mM MgCl ir sureguliuokite pH iki 8–9.
Pridėkite UltraNuclease santykiu 250 vienetų, kad suvirškintumėte 1 g ląstelių nuosėdų, inkubuokite 37 ℃ temperatūroje ilgiau nei 30 minučių.Norėdami pasirinkti, žr. formą „Rekomenduojamas reakcijos laikas“.gydymo trukmė.
4. Supernatantas Kolekcija
Centrifuguokite 12 000 aps./min. greičiu 30 minučių ir surinkite supernatantą.
Pastaba: jei tirpalas yra rūgštus ar šarminis arba jame yra didelės koncentracijos druskos, ploviklių arbadenatūrantų, padidinkite fermento dozę arba atitinkamai pailginkite gydymo laiką.
Rekomenduojamos reakcijos sąlygosons
| Parametras | Optimali būklė | Efektyvus kondicionierius |
| Mg²+Koncentracija | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatūra | 37℃ | 0-42 ℃ |
| DTT koncentracija | 0-100 mM | >0 mM |
| Merkaptoetanolio koncentracija | 0-100 mM | >0 mM |
| Vienavalenčių katijonų koncentracija | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Fosfato lon koncentracija | 0-10 mM | 0-100 mM |
Rekomenduojamas Reakcija Laikas (37 ℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| UltraNuclease kiekis (galutinė koncentracija) | Reakcijos laikas |
| 0,25 U/ml | >10 val |
| 2,5 V/mL | >4 val |
| 25 V/mL | 30 min |
Pastabos:
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!
