Temperatūrai jautrus UNG
Temperatūrai jautrus UNG (TS-UNG) yra gautas rekombinantinės ekspresijos būdu E. coli.Fermentas katalizuoja laisvo uracilo išsiskyrimą iš uracilo turinčios vienos ir dvigrandės DNR ir yra neaktyvus prieš RNR.Palyginti su įprastiniu E. coli genų kilmės UNG fermentu, TS-UNG fermentas pasižymi didesniu aktyvumu žemoje temperatūroje (20 ℃ ~ 37 ℃), yra jautrus temperatūrai ir lengvai inaktyvuojamas (50 ℃), todėl išvengiama dUTP turinčios amplifikacijos skilimo. produktai kambario temperatūroje pagal likutinį aktyvumą, kuris gali likti inaktyvavus įprastą UNG fermentą.Todėl TS-UNG fermentas ne tik tinka PGR užteršimo prevencijos reakcijai, bet ir gerai dera su RT-PGR amplifikacijos programa ir gali būti naudojamas RT-PGR užteršimo prevencijos reakcijoje.
Rekomenduojama taikymas
Užteršimo prevencijos stiprinimas
Sandėliavimo būklė
-20°C ilgalaikiam saugojimui, prieš naudojimą reikia gerai išmaišyti, vengti dažno užšalimo ir atšildymo.
Saugojimo buferis
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizatorius, 50 % glicerolio.
Vieneto apibrėžimas
Fermento kiekis, reikalingas 1 µg vienos grandinės DNR, turinčios dU bazių, suskaidymui per 1 valandą 37 °C temperatūroje yra 1 aktyvumo vienetas (U).
Kokybės kontrolė
1.SDS-PAGE elektroforezinis grynumas didesnis nei 98 %
2.Skilimo aktyvumas, partijų valdymas, stabilumas
3.Nėra egzogeninės nukleazės aktyvumo, nėra egzogeninės endonukleazės ar egzonukleazės užteršimo.
Instrukcijos
| Komponentai | Tūris (μL) | Galutinė koncentracija |
| 10 × PGR buferis (be dNTP, Mg²+Laisvas) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (pakeiskite dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1–0,5) | 0,5 U (0,1–0,5 U) |
| 25 × Grunto mišinysa | 2 | 1× |
| Šablonas | - | ＜1 μg / reakcija |
| ddH₂O | Iki 50 | - |
Pastaba: a: Jei naudojamas qPCR/qRT-PGR, fluorescencinis zondas turi būti įtrauktas į reakcijos sistemą.Paprastai 0,2 μM galutinė pradmenų koncentracija gali duoti gerų rezultatų;kai reakcijos efektyvumas yra prastas, pradmenų koncentracija gali būti reguliuojama 0,2-1 μM intervale.Paprastai zondo koncentracija optimizuojama 0,1–0,3 μM diapazone.Norint rasti geriausią pradmenų ir zondo derinį, galima atlikti koncentracijos gradiento eksperimentus.
Pastabos
1.Optimali TS-UNG fermento reakcijos temperatūra yra santykinai žema, ją galima optimizuoti 20 ℃ ~ 37 ℃ diapazone, fermento dozę ir reakcijos laiką galima optimizuoti nuo 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min.;ir fermentas gali būti inaktyvuotas atvirkštinės transkripcijos procese.
2.Jis tinka PGR ir RT-PGR, kad būtų išvengta užteršimo.
3.Venkite dažno užšalimo ir atšildymo ir saugokite nuo didelių temperatūros svyravimų.
4.Skirtingi amplifikuotini genai turi skirtingą dUTP panaudojimo efektyvumą ir jautrumą UNG fermentui, todėl, jei naudojant UNG sistemą sumažėja aptikimo jautrumas, reikia pakoreguoti ir optimizuoti reakcijos sistemą, jei reikia techninės pagalbos, kreipkitės į mūsų kompanija.
