Rnase A
Ribonukleazė A (RNaseA) yra vienos grandinės polipeptidas, turintis 4 disulfidines jungtis, kurių molekulinė masė yra apie 13,7 kDa.RNazė A yra endoribonukleazė, kuri specifiškai skaido vienos grandinės RNR ties C ir U liekanomis.Konkrečiai, skilimas atpažįsta fosfodiesterio ryšį, susidarantį iš nukleotido 5'-ribozės ir fosfato grupės, esančios gretimo pirimidino nukleotido 3'-ribozėje, todėl 2, 3'-cikliniai fosfatai yra hidrolizuojami iki atitinkamų33. ′nukleozidų fosfatai (pvz., pG-pG-pC-pA-pG skaido RNazė A, kad susidarytų pG-pG-pCp ir A-PG).RNazė A yra aktyviausia skaidant vienos grandinės RNR.Rekomenduojama darbinė koncentracija 1-100μG/mL, suderinama su įvairiomis reakcijų sistemomis.Maža druskos koncentracija (0-100 mM NaCl) gali būti naudojama viengrandei RNR, dvigrandei RNR ir RNR grandinėms, susidariusioms RNR-DNR hibridizacijos būdu, pjaustyti.Tačiau esant didelei druskos koncentracijai (≥0,3 M), RNazė A specifiškai skaido tik vienos grandinės RNR.
RNRazė A dažniausiai naudojama RNR pašalinimui ruošiant plazmidinę DNR arba genominę DNR. Nesvarbu, ar DNazė yra aktyvi paruošimo proceso metu, gali lengvai paveikti reakciją.DNazės aktyvumui inaktyvuoti gali būti naudojamas tradicinis virimo vandens vonioje metodas.Šiame gaminyje nėra DNazės ir proteazės, todėl prieš naudojant nereikia termiškai apdoroti.Be to, šis produktas taip pat gali būti naudojamas atliekant molekulinės biologijos eksperimentus, tokius kaip RNazės apsaugos analizė ir RNR sekos analizė.
Laikymo sąlygos
Produktas gali būti laikomas -25～-15 ℃ temperatūroje, galioja 2 metus.
Instrukcijos
Tai vienas iš įprastų RNazės A saugojimo tirpalo paruošimo metodų.Jį taip pat gali paruoštikiti metodai pagal tradicinius metodus laboratorinėje ar informacinėje literatūroje (pvz.,tiesiogiai ištirpinama 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 arba Tris-NaCl tirpale)
1. Naudokite 10 mM natrio acetatą (pH 5,2), kad paruoštumėte 10 mg/ml RNazės A laikymo tirpalo.
2. Kaitinimas 100 ℃ 15 min
3. Atvėsinkite iki kambario temperatūros, įpilkite 1/10 tūrio 1 M Tris-HCl (pH 7,4), sureguliuokite pH iki 7,4 (jeiPavyzdžiui, įpilkite 500 ml 10 g/ml RNazės saugojimo tirpalo 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Supakuota -20 ℃ temperatūroje, skirta laikyti užšaldyta, kuri gali būti stabili iki 2 metų.
[Pastabos]: verdant RNazėsA tirpalą neutraliomis sąlygomis, susidarys RNazės nuosėdos;Virinama esant žemesniam pH, o jei yra kritulių, tai gali būti pastebėta dėl baltymų priemaišų.Jei po virinimo aptinkamos nuosėdos, priemaišas galima pašalinti centrifuguojant dideliu greičiu (13 000 aps./min.), o po to supakuoti į užšalimą.
Produkto informacija
| Sinonimai | ribonukleazė I;Kasos ribonukleazė;ribonukleazė 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolazė;Rnazė A;Endoribonulceazė I |
| CAS Nr. | 9001-99-4 |
| Išvaizda | Balti liofilizuoti milteliai |
| Molekulinė masė | ~ 13,7 kDa (aminorūgščių seka) |
| Ph vertė | 7,6 (6–10 veiklos diapazonas) |
| Tinkama temperatūra | 60 ℃ (aktyvumo diapazonas 15-70 ℃) |
| Aktyvuojantis agentas | Na2+.K+ |
| Inhibitorius | Rnazės inhibitorius |
| Inaktyvavimo būdas | Negalima inaktyvuoti kaitinant, rekomenduojama naudoti centrifugavimo kolonėlę |
| Kilmė | Jautienos |
| Tirpumas | Tirpsta vandenyje (10mg/ml) |
| Praradimas sausoje vietoje | ≤5,0 % |
| Fermentų aktyvumas | ≥60 Kunitz vienetų/mg |
| Izoelektrinis taškas | 9.6 |
Pastabos
Dėl savo saugumo ir sveikatos dirbdami dėvėkite laboratorinius chalatus ir vienkartines pirštines.
