Vieno žingsnio greitas RT-qPCR zondo premiksas-UNG
Katės Nr.: HCR5143A
Vieno žingsnio RT-qPCR zondo rinkinys (FOR FAST) yra zondo pagrindu sukurtas RT-qPCR greito aptikimo rinkinys, tinkamas vienpusei arba daugybinei kiekybinei PGR, naudojant RNR kaip šabloną (pvz., RNR virusą).Šiame produkte naudojama naujos kartos antikūnais modifikuota Taq DNR polimerazė ir vieno žingsnio atvirkštinė transkriptazė su optimizuotu buferiu greitam amplifikavimui, kuris pasižymi didesniu amplifikacijos greičiu, didesniu amplifikacijos efektyvumu ir specifiškumu.Jis palaiko subalansuotą mažos ir didelės koncentracijos mėginių vienpusio ir multiplekso stiprinimą per trumpą laiką.
Komponentai
1. 5 × RT-qPCR buferis (U+)
2. Fermentų mišinys (U+)
Pastabos:
a.5×RT-qPCR buferis (U+) apima dNTP ir Mg2+;
b.Fermentų mišinys (U+) apima atvirkštinę transkriptazę, Hot Start Taq DNR polimerazę, RNazės inhibitorių ir UDG;
c.Naudokite RNase-Free antgalius, EP vamzdelius ir kt.
Prieš naudodami gerai sumaišykite 5×RT-qPCR buferį (U+).Jei po atšildymo atsiranda nuosėdų, palaukite, kol buferis sušils iki kambario temperatūros, sumaišykite ir ištirpinkite, tada naudokite juos įprastai.
Laikymo sąlygos
Produktas siunčiamas su sausu ledu ir gali būti laikomas -25 ~ -15 ℃ 1 metus.
Instrukcijos
1. Reakcija Sistema
| Komponentai | Tūris (20 μl reakcija) |
| 2 × RT-qPCR buferis | 4 μl |
| Fermentų mišinys (U+) | 0,8 μl |
| Primer Forward | 0,1–1,0 μM |
| Gruntas Reverse | 0,1–1,0 μM |
| „TaqMan“ zondas | 0,05–0,25 μM |
| Šablonas | X μL |
| Vanduo be RNazės | iki 25 μl |
Pastabos: Reakcijos tūris yra 10-50μL.
2. Dviračių protokolas (Sstandartinis)
| Ciklas žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
| Atvirkštinė transkripcija | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Pradinė denatūracija | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denatūravimas | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Atkaitinimas / pratęsimas | 60 ℃ | 30 sek |
| Dviračių protokolas (Greitai) Ciklas žingsnis |
Temp. |
Laikas |
Ciklai |
| Atvirkštinė transkripcija | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Pradinė denatūracija | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denatūravimas | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Atkaitinimas / pratęsimas | 60 ℃ | 10 s |
Pastabos:
a.Atvirkštinės transkripcijos temperatūra yra nuo 50 ℃ iki 60 ℃, temperatūros didinimas padeda sustiprinti sudėtingas struktūras ir didelio CG turinio šablonus;
b.Optimali atkaitinimo temperatūra turi būti sureguliuota pagal pradmens Tm vertę ir pasirinkti trumpiausią fluorescencinio signalo surinkimo laiką, remiantis realiojo laiko PGR prietaisu.
Pastabos
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!
