Multiplex qPCR zondo premiksas
Katės Nr.: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (pagrįstas dažais) yra išankstinis sprendimas, skirtas 2 × realaus laiko kiekybiniam PGR amplifikavimui, pasižymintis dideliu jautrumu ir specifiškumu, kuris yra mėlynos spalvos ir turi mėginio pridėjimo poveikį.Šis produktas yra 2 × Mix iš anksto sumaišytas reagentas, kuris įgalina iki keturių fluorescencinių kiekybinių PGR reakcijų viename reakcijos šulinyje.Šiame produkte yra genetiškai modifikuotų antikūnų metodas karštam Taq fermentui, labai pagerinantis amplifikacijos jautrumą ir specifiškumą.Tuo pačiu metu šis produktas giliai optimizavo kelių reakcijų buferį, kuris gali pagerinti reakcijos stiprinimo efektyvumą ir skatinti efektyvų mažos koncentracijos šablonų stiprinimą.Šis produktas gali būti naudojamas genotipų nustatymui ir daugybinei kiekybinei analizei.
Specifikacija
| Karšta pradžia | Integruotas karštas paleidimas |
| Aptikimo metodas | Pradmenų-zondo aptikimas |
| PGR metodas | qPCR |
| Polimerazė | Taq DNR polimerazė |
| Mėginio tipas | DNR |
Laikymo sąlygos
Produktas siunčiamas su sausu ledu ir gali būti laikomas -25 ~ -15 ℃ temperatūroje 2 metus.
Instrukcijos
1. ReakcijaSistema
| Komponentai | Tūris (μL) | Galutinė koncentracija |
| 2 × TaqMan multipleksinis qPCR pagrindinis mišinys | 12.5 | 1× |
| Grunto mišinys (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Zondo mišinys (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox etaloniniai dažai | 0.5 | 1× |
| DNR/cDNR šablonas | 1-10 | - |
| ddH2O | iki 25 | - |
Pastabos:Prieš naudojimą gerai išmaišykite, kad išvengtumėte per daug burbuliukų dėl stipraus purtymo.
a.Grunto koncentracija: Pradmenų mišinyje yra kelios pradmenų poros, paprastai kiekvieno pradmens galutinė koncentracija yra 0,2 μmol/L, taip pat atitinkamai galima nustatyti tarp 0,1 ir 0,5 μmol/L.
b.Zodo koncentracija: Probe Mix yra keli zondai su skirtingais fluorescencijos signalais, o kiekvieno zondo koncentracija gali būti reguliuojama nuo 50 iki 250 nmol/L, atsižvelgiant į konkrečią situaciją.
1.Rox dažų nuoroda: naudojamas realaus laiko PGR amplifikacijos prietaise, pvz., Applied Biosystems, kad būtų ištaisyta tarp šulinių generuojamo fluorescencinio signalo paklaida;šiame gaminyje nėra Rox dažų nuorodos.Jei reikia, rekomenduojama naudoti Cas#10200.
2.Šablono skiedimas: qPCR yra labai jautrus, todėl rekomenduojama naudoti šabloną skiesti.Jei šablonas yra pradinis cDNR tirpalas, šablono tūris neturi viršyti 1/10 viso tūrio.
3.Reakcijos sistema: siekiant užtikrinti tikslinio geno amplifikacijos efektyvumą ir pakartojamumą, rekomenduojama 25 μL, 30 μL arba 50 μL.
4.Sistemos paruošimas: pasiruoškite itin švariame stende ir naudokite antgalius bei reakcijos vamzdelius be nukleazės likučių;antgalius rekomenduojama naudoti su filtrų kasetėmis.Venkite kryžminio užteršimo ir aerozolio.
2.Reakcijos programa
| Ciklo žingsnis | Temp. | Laikas | Ciklai |
| Pradinė-denatūracija | 95 ℃ | 5 min | 1 |
| Denatūravimas | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Atkaitinimas / pratęsimas | 60 ℃ | 30 sek |
Pastabos:
1.Atkaitinimas / pratęsimas: temperatūrą ir laiką galima tinkamai sureguliuoti pagal suprojektuotą grunto Tm vertę.
2.Fluorescencinio signalo gavimas: Fluorescencinio signalo gavimo laikas, reikalingas skirtingiems qPCR aptikimo instrumentams, skiriasi, nustatykite pagal minimalų laiko limitą.Kelių įprastų instrumentų laikas nustatomas taip:
20 sek.: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek.: Applied Biosystems 7300
32 sek.: Applied Biosystems 7500
Pastabos
Dėvėkite būtinas AAP, pvz., laboratorinį chalatą ir pirštines, kad užtikrintumėte savo sveikatą ir saugumą!
