Pelės genotipų rinkinys

Katės Nr.: HCR2021A

Šis produktas yra rinkinys, skirtas greitai nustatyti pelių genotipus, įskaitant neapdorotos DNR ekstrahavimo ir PGR amplifikacijos sistemą.Produktas gali būti naudojamas PGR amplifikacijai tiesiai iš pelės uodegos, ausies, kojų pirštų ir kitų audinių po paprasto skilimo naudojant lizės buferį ir proteinazę k.Nereikia virškinti per naktį, ekstrahuoti fenoliu-chloroformu ar valyti kolonėlėmis, nes tai yra paprasta ir sutrumpina eksperimentų laiką.Produktas tinkamas tikslinių fragmentų amplifikacijai iki 2 kb ir daugkartinėms PGR reakcijoms su iki 3 pradmenų poromis.2 × Mouse Tissue Direct PCR mišinyje yra genetiškai modifikuotos DNR polimerazės, Mg²⁺, dNTP ir optimizuota buferio sistema, užtikrinanti aukštą amplifikacijos efektyvumą ir inhibitorių toleranciją, kad PGR reakcijas būtų galima atlikti pridedant šabloną ir pradmenis ir rehidratuojant produktą iki 1 ×.Šiuo produktu amplifikuotas PGR produktas turi ryškią „A“ bazę 3′ gale ir gali būti tiesiogiai naudojamas TA klonavimui po gryninimo.

Komponentai

Laikymo sąlygos

Produktai turi būti laikomi -25–15 ℃ temperatūroje 2 metus.Po atšildymo Lizės buferis gali būti laikomas 2–8 ℃ temperatūroje trumpam naudojimui daugkartiniam naudojimui, o naudojant jį gerai išmaišyti.

Taikymas

Šis produktas tinka pelės išmušimo analizei, transgenų aptikimui, genotipui nustatyti ir pan.

funkcijos

1.Paprasta operacija: nereikia išskirti genominės DNR;

2.Platus pritaikymas: tinka tiesioginiam įvairių pelių audinių stiprinimui.

Instrukcijos

1.Genominės DNR išskyrimas

1) Lizato paruošimas

Audinių lizatas ruošiamas pagal lizuojamų pelių mėginių skaičių (audinių lizatas turi būti paruoštas vietoje pagal dozę ir kruopščiai sumaišytas, kad būtų naudojamas), o reagentų, reikalingų vienam mėginiui, dalis yra tokia:

2) Mėginio paruošimas ir lizė

Rekomenduojamas audinių naudojimas

Paimkite atitinkamą kiekį pelių audinių mėginių į švarius centrifugos mėgintuvėlius, į kiekvieną centrifugos mėgintuvėlį įpilkite 200 μL šviežio audinių lizato, sumaišykite ir suplakite, tada inkubuokite 55 ℃ temperatūroje 30 min., o tada kaitinkite 98 ℃ temperatūroje 3 minutes.

3) Centrifugavimas

Lizatą gerai sukratykite ir centrifuguokite 12 000 aps./min. greičiu 5 minutes.Supernatantas gali būti naudojamas kaip šablonas PGR amplifikacijai.Jei šablonas reikalingas saugojimui, supernatantą perkelkite į kitą sterilų centrifugos mėgintuvėlį ir 2 savaites laikykite -20 ℃ temperatūroje.

2.PCR amplifikacija

Išimkite 2 × Mouse Tissue Direct PCR mišinį nuo -20 ℃ ir atšildykite ant ledo, sumaišykite aukštyn kojomis ir paruoškite PGR reakcijos sistemą pagal šią lentelę (veikia ant ledo):

Pastaba:

a) Pridedamas kiekis neturi viršyti 1/10 sistemos, o jei pridedama per daug, PGR amplifikacija gali būti slopinama.

Rekomenduojamos PGR sąlygos

Pastaba:

a) Atkaitinimo temperatūra: atsižvelgiant į grunto Tm vertę, rekomenduojama atkaitinimo temperatūrą nustatyti į mažesnę grunto Tm vertę +3 ~ 5 ℃.

Dažnos problemos ir sprendimai

1.Nėra tikslinių juostelių

1) Per didelis lizės produktas.Pasirinkite tinkamiausią šablono kiekį, dažniausiai ne daugiau kaip 1/10 sistemos;

2) Per didelis imties dydis.Lizatą praskieskite 10 kartų, tada amplifikuokite arba sumažinkite mėginio dydį ir pakartotinai lizuokite;

3) Audinių mėginiai nėra švieži.Rekomenduojama naudoti šviežius audinių mėginius;

4) Prasta grunto kokybė.Amplifikacijai naudokite genominę DNR, kad patikrintumėte pradmenų kokybę ir optimizuotumėte pradmenų dizainą.

2.Nespecifinis stiprinimas

1) Atkaitinimo temperatūra per žema, o ciklo skaičius per didelis.Padidinkite atkaitinimo temperatūrą ir sumažinkite ciklų skaičių;

2) Šablono koncentracija per didelė.Sumažinkite šablono kiekį arba atskieskite šabloną 10 kartų po amplifikacijos;

3) Prastas pradmenų specifiškumas.Optimizuokite grunto dizainą.

Pastabos

1.Siekiant išvengti kryžminio mėginių užteršimo, reikia paruošti kelis mėginių ėmimo įrankius, o įrankių paviršius po kiekvieno mėginio ėmimo gali būti nuvalytas 2 % natrio hipochlorito tirpalu arba nukleorūgšties valikliu, jei reikia pakartotinai naudoti.

2.Rekomenduojama naudoti šviežius pelės audinius, o mėginių ėmimo tūris neturi būti per didelis, kad nepakenktų amplifikacijos rezultatams.

3.Lizės buferis turi vengti dažno užšalimo ir atšildymo ir gali būti laikomas 2–8 ℃ temperatūroje, kad būtų galima naudoti daugkartiniam trumpam laikui.Laikant žemoje temperatūroje, gali susidaryti nuosėdų, todėl prieš naudojimą jie turi būti visiškai ištirpinti.

4.PGR mišinį reikia vengti dažno užšalimo ir atšildymo, todėl jį galima laikyti 4 ℃ temperatūroje trumpam pakartotiniam naudojimui.

5.Šis produktas skirtas tik moksliniams eksperimentiniams tyrimams ir neturėtų būti naudojamas klinikinei diagnostikai ar gydymui.