BspQI
BspQI gali būti rekombinantiškai ekspresuojamas E. coli, kuris gali atpažinti specifines vietas ir yra gaminamas pagal
BspQI, IIs restrikcijos endonukleazės restrikcijos endonukleazė, yra gauta iš rekombinantinės E. coli padermės, turinčios klonuotą ir modifikuotą BspQI geną iš Bacillus sphaericus.Jis gali atpažinti konkrečias vietas, o atpažinimo seka ir skilimo vietos yra tokios:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Prekės savybės
1. Didelis aktyvumas, greitas virškinimas;
2. Žemas žvaigždžių aktyvumas, užtikrinantis tikslų pjovimą kaip „skalpelis“;
3. Be BSA ir gyvulinės kilmės;
Metilinimo jautrumas
Desu metilinimas:Nejautri;
Dcm metilinimas:Nejautri;
CpG metilinimas:Nejautri;
Laikymo sąlygos
Produktas turi būti išsiųstas ≤ 0 ℃;Laikyti -25-15 ℃ temperatūroje.
Saugojimo buferis
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitolio, 500 µg/ml rekombinantinio albumino, 0,1 % Trition X-100 ir 50 % glicerolio (pH 7,0 @ 25 °C).
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, reikalingas suvirškinti 1 µg vidinės kontrolinės DNR per 1 valandą 50 °C temperatūroje, kai bendras reakcijos tūris yra 50 µL.
Kokybės kontrolė
Baltymų grynumo tyrimas (SDS-PAGE):BspQI grynumas buvo ≥95%, nustatytas SDS-PAGE analize.
RNazė:10 V BspQI su 1,6 μg MS2 RNR 4 valandas 50 ℃ temperatūroje nesuskaido, kaip nustatyta agarozės gelio elektroforeze.
Nespecifinis DNazės aktyvumas:10 U BspQI su 1 μg λ DNR 50 ℃ temperatūroje 16 valandų, palyginti su 50 ℃ 1 valandą, DNR pertekliaus nesukelia, kaip nustatyta agarozės gelio elektroforeze.
Perrišimas ir iškirpimas:Suskaidžius 1 μg λDNR su 10 U BspQI, DNR fragmentai gali būti susieti su T4 DNR ligaze esant 16 °C temperatūrai.Ir šiuos susietus fragmentus galima iš naujo iškirpti naudojant BspQI.
E. coli DNR: E. coli 16s rDNR specifinis TaqMan qPCR aptikimas parodė, kad E.coli genomo liekana ≤ 0,1 pg/ul.
Šeimininko baltymo liekanos:≤ 50 ppm
Bakterinė Endotoksinas: LAL testas, pagal Kinijos farmakopėjos IV 2020 leidimą, gelio ribos tyrimo metodas, bendroji taisyklė (1143).Bakterijų endotoksinų kiekis turi būti ≤10 EU/mg.
Reakcijos sistema ir sąlygos
| Komponentas | Apimtis |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNR | 1 μg |
| 10 x BspQ I buferis | 5 μl |
| dd H2O | Iki 50 μl |
Reakcijos sąlygos: 50 ℃, 1-16 val.
Šilumos inaktyvavimas: 80°C 20 min.
Rekomenduojama reakcijos sistema ir sąlygos gali užtikrinti gana gerą fermentų virškinimo efektą, kuris yra skirtas tik nuorodai. Išsamesnės informacijos ieškokite eksperimento rezultatuose.
Produkto taikymas
Restrikcijos endonukleazės virškinimas, greitas klonavimas.
Pastabos
1. Fermento tūris ≤ 1/10 reakcijos tūrio.
2. Žvaigždžių aktyvumas gali atsirasti, kai glicerolio koncentracija yra didesnė nei 5%.
3. Skilimo aktyvumas gali atsirasti, kai substrato santykis mažesnis už rekomenduojamą.
