Ultra Nuclease
UltraNuclease yra genetiškai modifikuota endonukleazė, gauta iš Serratia marcescens, kuri įvairiomis sąlygomis gali skaidyti DNR arba RNR, tiek dvigrandės, tiek viengrandės, linijines arba žiedines, visiškai skaidyti nukleorūgštis į 5'-monofosfato oligonukleotidus, kurių ilgis yra 3-5 bazių. .Po genų inžinerijos modifikavimo produktas buvo fermentuotas, ekspresuojamas ir išgrynintas Escherichia coli (E. coli), o tai sumažina ląstelių supernatanto ir ląstelių lizato klampumą, bet taip pat pagerina baltymų valymo efektyvumą ir funkcinius tyrimus.Jis taip pat gali būti naudojamas genų terapijoje, virusų valymui, vakcinų gamyboje, baltymų ir polisacharidų farmacijos pramonėje kaip šeimininko liekanų nukleorūgščių šalinimo reagentas.
Prekės savybės
| CAS Nr. | 9025-65-4 |
| EB Nr. | |
| Molekulinė masė | 30 kDa |
| Izoelektrinis taškas | 6.85 |
| Baltymų grynumas | ≥99 % (SDS-PAGE ir SEC-HPLC) |
| Specifinė veikla | ≥1.1 × 106 V/mg |
| Optimali temperatūra | 37°C |
| Optimalus pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | neigiamas |
| Bionašta | ＜10 CFU / 100 000 U |
| Likęs šeimininko ląstelės baltymas | ≤10 ppm |
| Sunkusis metalas | ≤10 ppm |
| Bakterinis endotoksinas | ＜0,25EU/1000U |
| Saugojimo buferis | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerolis |
Laikymo sąlygos
≤0°C transportavimas；-25~-15°C Sandėliavimas, 2 metų galiojimas (venkite užšalimo-atšildymo).
Vieneto apibrėžimas
Fermento kiekis, naudojamas △A260 absorbcijos vertei pakeisti 1,0 per 30 minučių esant 37 °C, pH 8,0, atitinkantis suvirškintą 37 μg lašišos spermos DNR, supjaustant į oligonukleotidus, buvo apibrėžtas kaip aktyvus vienetas (U).
Kokybės kontrolė
Likęs šeimininko ląstelės baltymas: ELISA rinkinys
•Proteazė Likučiai: 250KU/mL UltraNuclease reagavo su substratu 60min, aktyvumo neaptikta.
•Bakterinis endotoksinas: LAL-Test, Pharmacopoeia of the People's Republic of China, 4 tomas (2020 m. leidimas) gelio ribinio tyrimo metodas.Bendrosios taisyklės (1143).
•Biologinė našta: Kinijos Liaudies Respublikos farmakopėja, 4 tomas (2020 m. leidimas) – Bendroji dalis
Sterilumo testo taisyklės (1101), KLR nacionalinis standartas, GB 4789.2-2016.
•Sunkusis metalas:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacija
UltraNuclease aktyvumas buvo žymiai slopinamas, kai SDS koncentracija buvo didesnė nei 0, 1% arba EDTA
koncentracija buvo didesnė nei 1 mM. Paviršinio aktyvumo medžiaga Triton X-100, Tween 20 ir Tween 80 neturėjo jokio poveikio nukleazei
savybės, kai koncentracija buvo mažesnė nei 1,5%.
| Operacija | Optimalus veikimas | Galiojanti operacija |
| Temperatūra | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100mM |
| 2-merkaptoetanolis | 0-100 mM | >100mM |
| Vienavalentinis metalo jonas (Na+, K+ ir kt.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Naudojimas ir dozavimas
• Pašalinkite egzogeninę nukleino rūgštį iš vakcinos produktų, sumažinkite liekamojo nukleino rūgščių toksiškumo riziką ir pagerinkite produktų saugą.
• Sumažinti pašarų skysčio klampumą, kurį sukelia nukleino rūgštis, sutrumpinti apdorojimo laiką ir padidinti baltymų išeigą.
• Pašalinkite nukleorūgštį, kuri apvyniojo dalelę (virusą, inkliuzinį kūną ir kt.), kuri yra palanki
dalelės išsiskyrimui ir valymui.
| Eksperimentinis tipas | Baltymų gamyba | Virusas, vakcina | Ląstelių vaistai |
| Ląstelių skaičius | 1 g ląstelės šlapio svorio (resuspenduotas 10 ml buferio) | 1L fermentacija skystas supernatantas | 1 l kultūros |
| Minimali dozė | 250 U | 100 U | 100 U |
| Rekomenduojamas dozavimas | 2500 U | 25 000 U | 5000 U |
• Nukleazės apdorojimas gali pagerinti mėginio skiriamąją gebą ir atkūrimą kolonėlės chromatografijos, elektroforezės ir blotavimo analizei.
• Genų terapijoje nukleino rūgštis pašalinama, kad būtų gauti išgryninti adeno-asocijuoti virusai.
