Šarminė fosfatazė (ALP)
apibūdinimas
Šarminė fosfatazė gaunama iš rekombinantinės E. coli padermės, turinčios TAB5 geną.Fermentas katalizuoja DNR ir RNR fosfomonoesterių 5' ir 3' galų defosforilinimą.Be to, jis hidrolizuoja ribozę, taip pat dezoksiribonukleozidų trifosfatus (NTP ir dNTP).TAB5 šarminė fosfatazė veikia 5'' išsikišusius, 5'' įdubusius ir bukus galus.Fosfatazė gali būti naudojama daugelyje molekulinės biologijos programų, tokių kaip klonavimas arba zondo galo žymėjimas, siekiant pašalinti fosforilintus DNR arba RNR galus.Klonavimo eksperimentuose defosforilinimas neleidžia tiesinei plazmidinei DNR savaime susijungti.Jis taip pat gali suardyti neįtrauktus dNTP PGR reakcijose, kad būtų paruoštas šablonas DNR sekos nustatymui.Fermentas visiškai ir negrįžtamai inaktyvuojamas kaitinant 70 °C temperatūroje 5 minutes, todėl fosfatazės pašalinimas prieš surišimą arba galo žymėjimą yra nereikalingas.
Naudojimas
1. Šarminė fosfatazė, sujungta su baltymais (antikūnais, streptavidinu ir kt.), gali specifiškai identifikuoti tikslines molekules ir gali būti naudojama ELISA, WB ir histocheminiam aptikimui;
2.Šarminė fosfatazė gali būti naudojama DNR arba RNR 5'-galui defosforizuoti, kad būtų išvengta savaiminio susijungimo;
3. Aukščiau nurodyta defosforilinta DNR arba RNR gali būti paženklinta radioaktyviai pažymėtais fosfatais (per T4 polinukleotidų kinazę).
Cheminė struktūra
Specifikacija
| Bandomieji elementai | Specifikacijos |
| Fermentų aktyvumas | 5U/μL |
| Endonukleazės aktyvumas | Neaptiktas |
| Egzonukleazės aktyvumas | Neaptiktas |
| Sniegavimo veikla | Neaptiktas |
| RNazės veikla | Neaptiktas |
| E.coli DNR | ≤1 kopija/5U |
| Endotoksinas | LAL testas, ≤10EU/mg |
| Grynumas | ≥ 95 % |
Transportavimas ir sandėliavimas
Transportas:AmbIent
Sandėliavimas:Laikyti 2-8°C temperatūroje
Rekomenduojamas pakartotinis testasGyvenimas:2 metai
