DNazė I
DNazė I (dezoksiribonukleazė I) yra endodezoksiribonukleazė, galinti virškinti viengrandę arba dvigrandę DNR.Jis atpažįsta ir suskaido fosfodiesterio ryšius, kad gautų monodeoksinukleotidus arba viengrandžius oligodeoksinukleotidus su fosfato grupėmis 5′-gale ir hidroksilo 3′-gale.DNazės I aktyvumas priklauso nuo Ca2+ ir gali būti aktyvuotas dvivalenčių metalų jonų, tokių kaip Mn2+ ir Zn2+.5mM Ca2+ apsaugo fermentą nuo hidrolizės.Esant Mg2+, fermentas gali atsitiktinai atpažinti ir suskaidyti bet kurią vietą bet kurioje DNR grandinėje.Esant Mn2+, dvigubos DNR grandinės gali būti vienu metu atpažįstamos ir suskaldytos beveik toje pačioje vietoje, kad susidarytų plokščio galo DNR fragmentai arba lipniojo galo DNR fragmentai, išsikišę 1-2 nukleotidai.
Produkto ypatybė
Galvijų kasos DNazė I buvo išreikšta mielių ekspresijos sistemoje ir išgryninta.
Ckomponentai
| Komponentas | Apimtis | |||
| 0,1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNazė I, be Rnazės | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I buferis | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transportavimas ir sandėliavimas
1. Sandėliavimo stabilumas: – 15℃~-25℃ sandėliavimui;
2. Transporto stabilumas: transportavimas po ledo paketais;
3. Tiekiamas: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % glicerolio, pH 7,6 25 ℃ temperatūroje.
Vieneto apibrėžimas
Vienas vienetas apibrėžiamas kaip fermento kiekis, kuris 37°C temperatūroje per 10 minučių visiškai suardys 1 µg pBR322 DNR.
Kokybės kontrolė
RNazė:5 U DNazės I su 1,6 μg MS2 RNR 4 valandas 37 ℃ temperatūroje nesuskaido, kaip nustatyta agarozės gelio elektroforeze.
Bakterinė Endotoksinas:LAL testas, pagal Kinijos farmakopėjos IV 2020 leidimą, gelio ribos tyrimo metodas, bendroji taisyklė (1143).Bakterijų endotoksinų kiekis turi būti ≤10 EU/mg.
Naudojimo instrukcijos
1. Paruoškite reakcijos tirpalą mėgintuvėlyje be RNazės pagal toliau nurodytas proporcijas:
| Komponentas | Apimtis |
| RNR | X μg |
| 10 × DNazės I buferis | 1 μl |
| DNazė I, be RNazės (5 U/μL) | 1 U μg RNR |
| ddH2O | Iki 10 μl |
2,37 ℃ 15 minučių;
3. Įpilkite užbaigimo buferio, kad sustabdytumėte reakciją, ir kaitinkite 65 ℃ temperatūroje 10 minučių, kad inaktyvuotų DNazę I. Mėginys gali būti tiesiogiai naudojamas kitam transkripcijos eksperimentui.
Pastabos
1. Naudokite 1 U DNazės I vienam μg RNR arba 1 U DNazės I, jei norite naudoti mažiau nei 1 μg RNR.
2. EDTA reikia pridėti iki galutinės 5 mM koncentracijos, kad apsaugotų RNR nuo skilimo fermento inaktyvacijos metu.
