CHO HCP ELISA rinkinys
Šiame tyrime naudojamas vienpakopis imunosorbento ELISA metodas.Mėginiai, kuriuose yra CHOK1 HCP, tuo pačiu metu reaguoja su HRP pažymėtu ožkos anti-CHOK1 antikūnu ir anti-CHOK1 antikūnu, padengtu ELISA plokštelėje, galiausiai sudarydami sumuštinį iš kietosios fazės antikūno-HCP pažymėto antikūno.Nesurištus antigenus-antikūnus galima pašalinti plaunant ELISA plokštelę.TMB substratas įpilamas į šulinėlį, kad reakcija būtų pakankama.Įpylus stabdymo tirpalo, spalvos vystymasis sustabdomas, o reakcijos tirpalo OD arba absorbcijos vertė, esant 450/650 nm, nuskaitoma mikroplokštelių skaitytuvu.OD vertė arba absorbcijos vertė yra proporcinga HCP kiekiui tirpale.Iš to HCP koncentraciją tirpale galima apskaičiuoti pagal standartinę kreivę.
Taikymas
Šis rinkinys naudojamas kiekybiškai nustatyti CHOK1 šeimininko ląstelės baltymų likučių kiekį mėginiuose.
Ckomponentai
| S/N | Komponentas | Koncentracija | Laikymo sąlygos |
| 1 | CHOK1 HCP standartas | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20 ℃, saugoti nuo šviesos |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, saugoti nuo šviesos |
| 4 | 20 × PBST 0,05 % | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Sustabdyti sprendimą | NA | RT |
| 6 | Mikroplokštelių sandarikliai | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Didelės adsorbcijos išankstinio dengimo plokštės | NA | 2-8 ℃ |
Reikalinga įranga
| Eksploatacinės medžiagos / Įranga | Gamyba | Katalogas |
| Mikroplokštelių skaitytuvas | Molekuliniai prietaisai | Spectra Max M5, M5e arba lygiavertis |
| Termomikseris | Eppendorfas | Eppendorf/5355 arba lygiavertis |
| Vortex maišytuvas | IKA | MS3 Digital arba lygiavertis |
Sandėliavimas ir stabilumas
1.Transportavimas -25~-15°C temperatūroje.
2.Laikymo sąlygos nurodytos 1 lentelėje;1-2 komponentai laikomi ≤-20°C temperatūroje, 5-6 RT,3、4、7、8 laikomi 2-8 ℃ temperatūroje;galiojimo laikas yra 12 mėnesių.
Produkto parametrai
1.Jautrumas: 1ng/mL
2.Aptikimo diapazonas: 3-100 ng/mL
3.Tikslumas: Intra-ansy CV≤ 10%, tarpbandinis CV≤ 15%
4.HCP aprėptis: >80 %
5.Specifiškumas: Šis rinkinys yra universalus, nes jis specifiškai reaguoja su CHOK1 HCP nepriklausomai nuo valymo proceso.
Reagento paruošimas
1.PBST 0,05 %
Paimkite 15 ml 20×PBST 0,05%, praskiesto ddH2O ir iki 300 ml.
2.1,0 % BSA
Iš buteliuko paimkite 1 g BSA ir praskieskite 100 ml PBST 0,05%, gerai išmaišykite, kol visiškai ištirps, ir laikykite 2–8 °C temperatūroje.Paruoštas skiedimo buferis galioja 7 dienas.Rekomenduojama paruošti pagal poreikį.
3.Aptikimo tirpalas 2μg/mL
Paimkite 48 μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ir praskieskite 11 952 μL 1 % BSA, kad gautumėte galutinę 2 μg/mL aptikimo tirpalo koncentraciją.
4.QC ir CHOK1 HCP standartų parengimas
| Vamzdis Nr. | Originalus | Koncentracija | Apimtis | 1% BSA | bendras tūris | Galutinis |
| A | Standartinis | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Lentelė: QC ir standartų rengimas
Tyrimo procedūra
1.Paruoškite reagentus, kaip nurodyta aukščiau esančioje dalyje „Reagentų paruošimas“.
2.Į kiekvieną duobutę paimkite 50 μL etalonų, mėginių ir QC (žr. 3 lentelę), tada įpilkite 100 μL aptikimo tirpalo (2 μg/mL);Uždenkite plokštę sandarikliu ir padėkite ELISA plokštelę ant termomikserio.Inkubuokite 500 aps./min., 25±3 ℃ 2 valandas.
3.Apverskite mikroplokštę kriaukle ir išmeskite dangos tirpalą.Į kiekvieną šulinėlį pipete įlašinkite 300 μl PBST 0,05 %, kad nuplautumėte ELISA plokštelę, išmestumėte tirpalą ir pakartokite plovimą 3 kartus.Apverskite lėkštę ant švaraus popierinio rankšluosčio ir nusausinkite.
4.Į kiekvieną šulinėlį įpilkite 100 μL TMB substrato (žr. 1 lentelę), uždarykite ELISA plokštelę ir inkubuokite tamsoje 25±3 ℃ 15 min.
5.Į kiekvieną šulinėlį pipete įpilkite 100 μl stabdymo tirpalo.
6.Išmatuokite absorbciją esant 450/650 nm bangos ilgiui su mikroplokštelių skaitytuvu.
7.Analizuokite duomenis naudodami SoftMax arba lygiavertę programinę įrangą.Nubraižykite standartinę kreivę naudodami keturių parametrų logistinės regresijos modelį.
Standartinės kreivės pavyzdys
PASTABA: Jei HCP koncentracija mėginyje viršija viršutinę standartinės kreivės ribą, prieš atliekant tyrimą jį reikia tinkamai praskiesti skiedimo buferiu.
PASTABOS
Stabdymo tirpalas yra 2M sieros rūgštis, elkitės atsargiai, kad neaptaškytų!
